RNA提取過程中試劑的作用是什么？
想必大家都會有這樣的一個疑問，RNA提取過程中試劑的作用是什么呢？下面就跟著上海東寰一起來看看吧。
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氯仿是分子量比較大的有機溶劑，在提取RNA時，氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。RNA提取過程，有機相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和RNA脫離，RNA進(jìn)入水相。下面就由 氯仿的作用有多個方面，加入氯仿，雖然有變性蛋白質(zhì)的作用，但是其主要用處是用來分相，實際上是加速有機相和水相的分層。
一般的trizol試劑在4度下是油狀懸浮液，提高溫度，放置一段時間，自然也會分相。離心后混合物分成三層：下層苯酚-氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為400ul?！緲?biāo)準(zhǔn)：1mlTrizol加200ul的氯仿，水樣層的容量大約為所加Trizol 容量的60% 】 上層水相，PH 5.1左右，當(dāng)溶液pH在酸性的時候，RNA分子就會沉淀在酚與溶液的界面，只有RNA分子留在水相。而當(dāng)pH接近中性時，RNA就會溶解在水相，（導(dǎo)致PH中性的大概原因是trizol與樣品比例不對，應(yīng)該盡量保證提取量的前提下使trizol過量） Trizol法提RNA，加氯仿就是要劇烈震蕩才行，這樣才能徹底地兩相混勻。
異丙醇的作用是通過-OH的疏水作用使得RNA鏈中的親水基團受到保護(hù)，等同于沉淀，但是這是個反應(yīng)時發(fā)生在水相中，與前面的氯仿不矛盾。通過將水樣層和異丙醇混合來沉淀RNA， RNA沉淀在離心前通常不可見，形成一膠狀片狀沉淀附著于試管壁和管底。 異丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一樣。只不過用量少一點，0.6V~1V就夠了，在水相很多，離心管容積有限，加不下太多乙醇的時候一般會用異丙醇沉淀。不過感覺效果不如乙醇，偶爾會有沉淀不出來東西的時候?！?00ul的水相對應(yīng)500ul的的異丙醇?！?醇沉淀是很經(jīng)常用的方法，因為RNA和某些雜質(zhì)不溶于異丙醇，所以可以用來沉淀。
乙醇沉淀的主要目的是沉淀+除鹽。 TRIzol主要物質(zhì)是異硫氰酸胍，它可以破壞細(xì)胞使ＲＮＡ釋放出來的同時，保護(hù)ＲＮＡ的完整性 。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA 可以通過異丙醇沉淀來還原。 無論是人、動物、植物還是細(xì)菌組織，TRIzol法對少量的組織(50-100 mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1 g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。TRIZOL試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。TRIZOL抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠作RNA 印 跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆。
上面就是上海東寰為您分享的小知識，如果您想了解更多，歡迎在線咨詢或撥打客服熱線，我們將提供全心全意的服務(wù)！
氯仿是分子量比較大的有機溶劑，在提取RNA時，氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。RNA提取過程，有機相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和RNA脫離，RNA進(jìn)入水相。下面就由 氯仿的作用有多個方面，加入氯仿，雖然有變性蛋白質(zhì)的作用，但是其主要用處是用來分相，實際上是加速有機相和水相的分層。
一般的trizol試劑在4度下是油狀懸浮液，提高溫度，放置一段時間，自然也會分相。離心后混合物分成三層：下層苯酚-氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為400ul?！緲?biāo)準(zhǔn)：1mlTrizol加200ul的氯仿，水樣層的容量大約為所加Trizol 容量的60% 】 上層水相，PH 5.1左右，當(dāng)溶液pH在酸性的時候，RNA分子就會沉淀在酚與溶液的界面，只有RNA分子留在水相。而當(dāng)pH接近中性時，RNA就會溶解在水相，（導(dǎo)致PH中性的大概原因是trizol與樣品比例不對，應(yīng)該盡量保證提取量的前提下使trizol過量） Trizol法提RNA，加氯仿就是要劇烈震蕩才行，這樣才能徹底地兩相混勻。
異丙醇的作用是通過-OH的疏水作用使得RNA鏈中的親水基團受到保護(hù)，等同于沉淀，但是這是個反應(yīng)時發(fā)生在水相中，與前面的氯仿不矛盾。通過將水樣層和異丙醇混合來沉淀RNA， RNA沉淀在離心前通常不可見，形成一膠狀片狀沉淀附著于試管壁和管底。 異丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一樣。只不過用量少一點，0.6V~1V就夠了，在水相很多，離心管容積有限，加不下太多乙醇的時候一般會用異丙醇沉淀。不過感覺效果不如乙醇，偶爾會有沉淀不出來東西的時候?！?00ul的水相對應(yīng)500ul的的異丙醇?！?醇沉淀是很經(jīng)常用的方法，因為RNA和某些雜質(zhì)不溶于異丙醇，所以可以用來沉淀。
乙醇沉淀的主要目的是沉淀+除鹽。 TRIzol主要物質(zhì)是異硫氰酸胍，它可以破壞細(xì)胞使ＲＮＡ釋放出來的同時，保護(hù)ＲＮＡ的完整性 。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA 可以通過異丙醇沉淀來還原。 無論是人、動物、植物還是細(xì)菌組織，TRIzol法對少量的組織(50-100 mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1 g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。TRIZOL試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。TRIZOL抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠作RNA 印 跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆。
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