大鼠耳軟骨細(xì)胞細(xì)胞分離培養(yǎng)

大鼠耳軟骨細(xì)胞細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定

【簡(jiǎn)介】

軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層，單個(gè)分布，體積較小，呈橢圓形，長(zhǎng)軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形，染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見(jiàn)數(shù)量不一的脂滴。

【材料】

手術(shù)剪、手術(shù)鑷、75%酒精、PBS、雙抗、FBS、培養(yǎng)皿、15ml離心管、II型膠原酶、胰蛋白酶。

【方法】

1）將耳軟骨收集在PBS中反復(fù)清洗，剪成lmm×1mm×1mm左右的組織塊 ，轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管中。

2）加入0.25%胰蛋白酶消化30min反復(fù)洗滌、離心。

3）加入2mg/mlII型膠原酶溶液置于37℃水浴中輕微振蕩消化 ，直至軟骨組織塊基本消失、溶液變混濁為止，一般需 6～8h。

4）剩下未消化的組織用1mg/mlII型膠原酶37℃震蕩消化過(guò)液，一般需要16～18個(gè)小時(shí)。

【培養(yǎng)】

軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)液：DMEM/F12活性成分：1%ITS、20ng/mL肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、5-10％胎牛血清(FBS)、40μg/mL維生素C(L-抗壞血酸)。

【鑒定】

1）免疫熒光鑒定

II型膠原蛋白抗體（Collagen II）。