SD大鼠支氣管上皮細(xì)胞
大鼠支氣管上皮細(xì)胞分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝，由氣管分出的一級支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細(xì)長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是，氣管是以“C”型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。支氣管上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
SD大鼠支氣管上皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)鑒定
A、無血清完全培養(yǎng)基制備：
1、Ham'sF12培養(yǎng)基；
2、5μg/ml牛垂體提取物；
3、3mg/ml牛血清白蛋白；
4、0.1μg/ml上皮生長因子，
5、50μmol/l磷酸乙醇胺；
6、50μg/ml胰島素；
7、50μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白；
8、0.3μmol/l氫化可的松（皮膚抗炎癥）；
9、2mmol/l的丙酮酸鈉（培液自有成分）；
B、上皮專用培液：
DMEM/F12 1:1、15%FBS、EGF 20 ng/ml、bFGF 25ng/ml、肝素鈉 10ug/ml；
分離方法：
1、大鼠麻醉后，無菌條件下暴露氣管和肺，截取氣管組織，保留支氣管；
2、環(huán)狀軟骨下方插管，生理鹽水灌洗3次，下端在支氣管末端處結(jié)扎，去除氣管表面結(jié)締組織，PBS清洗干凈，然后灌入1%鏈酶蛋白酶，結(jié)扎氣管分支處，置裝有無血清培液的培養(yǎng)皿中保持濕潤，4℃過夜（或0.25%胰酶4°消化過夜）；
3、消化時間到后，用F12培養(yǎng)基沖洗支氣管，再剪開支氣管用細(xì)胞刷充分刷洗，收集培養(yǎng)皿中的刷洗液，1000r/5min離心洗滌收集細(xì)胞。
4、棄上清后完全培養(yǎng)液重懸37°培養(yǎng)，24h后細(xì)胞貼壁換液；
鑒定：
免疫熒光鑒定陽性：角蛋白（CK 18）；
陰性:Vimentin;
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